4. Медико-биологическое тестирование безопасности наноматериалов на культурах клеток высших животных

• 4.1. Требования к используемым культурам клеток

• 4.2. Схема введения наноматериалов животным и сроки наблюдения

• 4.3. Подготовка аэрозольно обработанных наноматериалами животных

• 4.4. Приборы и оборудование

• 4.5. Материалы и реактивы

• 4.6. Приготовление растворов и сред

• 4.7. Получение и культивирование клеточных культур

  • 4.7.1. Получение первичных клеточных культур

  • 4.7.2. Ведение и подготовка перевиваемых клеточных культур к тестированию

• 4.8. Проведение тестирования безопасности наноматериалов in vitro с использованием клеточных культур

  • 4.8.1. Подготовка клеточных культур и образцов наноматериалов к тестированию и внесение образца наноматериала в культуру

  • 4.8.2. Ход тестирования

• 4.9. Оценка цитотоксических свойств наноматериалов

  • 4.9.1. Оценка цитотоксичности с помощью МТТ

  • 4.9.2. Оценка цитотоксичности путем определения активности лактатдегидрогеназы

  • 4.9.3. Оценка цитотоксичности путем определения концентрации АТФ в лейкоцитах

  • 4.9.4. Оценка влияния наноматериалов на функциональную активность макрофагов

  • 4.9.5. Определение активности ферментов, участвующих в "респираторном взрыве"

  • 4.9.6. Оценка влияния наноматериалов на ФМА-индуцированную дифференцировку моноцитарных клеточных культур в макрофаги

  • 4.9.7. Оценка влияния наноматериалов на продукцию макрофагами фактора некроза опухоли-альфа

• 4.10. Оценка иммунотропного действия наноматериалов

  • 4.10.1. Оценка влияния наноматериалов на поликлональную активацию лимфоцитов в реакции бласттрансформации лимфоцитов

  • 4.10.2. Оценка влияния наноматериалов на продукцию лимфоцитами интерферона-гамма методом ИФА

• 4.11. Оценка безопасности наноматериалов методом проточной цитофлюориметрии по качественным и количественным изменениям в клетках высших животных

  • 4.11.1. Определение содержания Т- и В-лимфоцитов и соотношения Т-хелперов и цитотоксических Т-лимфоцитов

  • 4.11.2. Выявление маркера ранней активации лимфоцитов

  • 4.11.3. Оценка апоптотической и пролиферативной активности лейкоцитов

  • 4.11.4. Оценка цитотоксического действия наноматериалов на лейкоциты периферической крови человека

  • 4.11.5. Определение цитолитической активности лимфоцитов

  • 4.11.6. Оценка фагоцитарной активности перитонеальных макрофагов животных

5. Оценка безопасности наноматериалов с использованием в качестве тест-объекта семян высших растений

• 5.1. Принцип биотестирования на проростках высших растений

• 5.2. Оборудование, материалы, реактивы

• 5.3. Характеристика тест-систем

• 5.4. Условия тестирования

• 5.5. Подготовка к проведению тестов

  • 5.5.1. Подготовка посуды для биотестирования

  • 5.5.2. Подготовка субстрата для проращивания семян высших растений

  • 5.5.3. Приготовление исследуемых проб наноматериалов

  • 5.5.4. Подготовка семян

• 5.6. Процедура биотестирования

• 5.7. Оценка и интерпретация результатов биотестирования

6. Оценка безопасности наноматериалов с использованием интегральных тестов на лабораторных животных

• 6.1. Предварительные замечания

• 6.2. Методики измерения легочной функции

  • 6.2.1. Методика измерения легочной функции in vivo-электроплетизмография

• 6.3. Методики измерения функций сердечно-сосудистой системы

  • 6.3.1. Тестирование безопасности наноматериалов на инвазивной модели тромбогенеза

  • 6.3.2. Методика электроплетизмографического измерения артериального давления в хвостовой артерии

    • Рис.1. Установка для измерения давления крови в хвостовой артерии у бодрствующих крыс

    • Рис.2. Измерение артериального давления в хвостовой артерии крысы

  • 6.3.3. Методика регистрации АД с использованием имплантируемых катетеров

    • Рис.3. Катетеры, используемые в экспериментах на крысах

    • Рис.4. Схема установки для регистрации артериального давления у бодрствующих крыс

    • Рис.5. Схема установки для моделирования air-jet стресса у крыс

    • Рис.6. Изменения среднего артериального давления и длительности пульсового интервала в опыте по тестированию барорефлекса у бодрствующей крысы

    • Рис.7. Анализ кривой артериального давления

    • Рис.8. Зависимость ЧСС от АД, полученная в эксперименте с многократным внутривенным введением разных доз фенилэфрина и нитропруссида натрия

    • Рис.9. Пример вэйвлет-анализа динамики R-R интервала в различных частотных диапазонах...

• 6.4. Тестирование безопасности наноматериалов на основе определения гематологических показателей лабораторных животных

  • 6.4.1. Определение кинетики агрегации и дезагрегации эритроцитов

  • 6.4.2. Оценка деформационных свойств эритроцитов и вязкости крови

• 6.5. Оценка безопасности наноматериалов по интегральным показателям системы детоксикации ксенобиотиков

  • 6.5.1. Метод гексеналовой пробы

  • 6.5.2. Метод пробы с бромсульфалеином

• 6.6. Оценка безопасности наноматериалов по интенсивности местных воспалительных реакций

  • 6.6.1. Методика накожных аппликаций

  • 6.6.2. Методика конъюнктивальной пробы

• 6.7. Тестирование безопасности наноматериалов по поведенческим реакциям животных

  • 6.7.1. Методика теста "открытое поле"

  • 6.7.2. Методика теста "приподнятый крестообразный лабиринт"

  • 6.7.3. Методика условного рефлекса пассивного избегания

• 6.8. Тестирование безопасности наноматериалов на основе определения физической выносливости животных

  • 6.8.1. Метод истощающего плавания

  • 6.8.2. Методика динамометрического измерения произвольной силы скелетных мышц передних конечностей